Методы диагностики паразитических заболеваний за последние 20-30 лет развивались не сильно активно. С момента внедрения ПЦР было сделано немного успехов в клиническом диагностическом тестировании, хотя изучаются новые технологии. Среди них достойное место занимает анализ крови на ИФА на паразитов.

Содержание
  1. Анализы для обнаружения паразитов
  2. Анализ ИФА на паразитов

Содержание
Свернуть
  • 1 Анализы для обнаружения паразитов
  • 2 Анализ ИФА на паразитов
    • Иммуноферментный анализ Фалкона (ф-ИФА)
    • Точечный иммуноферментный анализ (т-ИФА)
    • Система быстрого обнаружения антигена (СБОА)
    • Система иммунопреципитации люциферазы (ИПЛ)

1 Анализы для обнаружения паразитов

Многие тесты, которые составляют основу «современной» лаборатории микробиологии, основаны на очень старых и трудоемких технологиях, таких как микроскопия малярии. В последние годы исследования были сфокусированы на альтернативных методах улучшения диагностики паразитарных заболеваний. К ним относятся иммунологические анализы, молекулярные подходы и протеомика с использованием технологии масс-спектрометрических платформ.

В настоящее время обнаружение и диагностика паразитарных инфекций основаны на нескольких лабораторных методах в дополнение к клиническим симптомам, истории болезни, истории путешествий и географическому положению пациента. Первичные тесты, используемые в настоящее время для диагностики многих паразитарных заболеваний, мало изменились с момента разработки микроскопа в 15 веке Антонио ван Левенгуком. Кроме того, большинство текущих тестов не могут различать прошлые, скрытые, острые и реактивированные инфекции и не могут быть полезны для последующего ответа на терапию или для прогноза.

Анализы для обнаружения паразитов
ИФА является, по своей сути, лабораторным иммунологическим тестом, указывающим на наличие гельминтов в организме пациента

Однако последние разработки в новых диагностических инструментах открыли новые возможности для значительного улучшения обнаружения паразитов. Во-первых, появился ряд новых анализов на основе серологии, которые являются высокоспецифичными и чувствительными, такие как:

  • иммуноферментный анализ Фалкона (ф-ИФА);
  • точечный ИФА анализ (т-ИФА);
  • система быстрого обнаружения антигена (СБОА);
  • иммунопреципитация люциферазы (ИПЛ).

Таблица 1. Диагностические инструменты для выявления специфических передаваемых через кровь паразитарных заболеваний

Паразитная инфекция Метод обнаружения
Африканский трипаносомоз ИФА
Бабезиоз ИФА
Болезнь Шагаса ИФА, т-ИФА
Лейшманиоз т-ИФА, ПЦР ИФА
Малярия ф-ИФА, ПЦР ИФА
Токсоплазмоз ИФА

Таблица 2. Диагностические инструменты для выявления специфических кишечных паразитарных заболеваний

Паразитная инфекция Метод обнаружения
Криптоспоридиоз ИФА
Фасциолоз ИФА, ф-ИФА, т-ИФА
Шистосомоз ИФА, ф-ИФА, т-ИФА
Цистицеркоз ИФА
Гидатидоз ИФА, т-ИФА
Филяриоз ИФА, т-ИФА,ПЦР ИФА
Строгилоидоз ИФА

2 Анализ ИФА на паразитов

Существуют вариации теста ИФА, но наиболее используемый тип состоит из антитела, прикрепленного к твердой поверхности (пластина из полистирола). Это антитело имеет взаимосвязь с интересующим веществом, такому как гормон, бактерии или другое антитело.

Например, человеческий хорионический гормон гонадотропина (ХГН), обычно измеряемый белок, который указывает на беременность, может быть обнаружен с помощью ИФА. Смесь очищенного ХГН, связанного с ферментом и испытуемым образцом (кровь или моча), добавляется в тестовую систему. Если в исследуемом образце нет ХГН, тогда только связанный фермент будет связываться с твердой поверхностью. Чем больше вещества представляет интерес в исследуемом образце, тем менее связанный фермент будет связываться с твердой поверхностью. Чем больше присутствующего вещества присутствует, оно вызывает реакцию и обнаруживается на тест-пластине каким-либо образом, например, изменение цвета.

Анализ ИФА на паразитов
Человеческий хорионический гормон гонадотропина (ХГН), обычно измеряемый белок, который указывает на беременность, может быть обнаружен с помощью ИФА

В ситуациях, когда биологические образцы или образцы тканей недоступны, только серология является золотым стандартом для диагностики.

Инструменты диагностики на основе серологий можно разделить на две категории: антиген-детектирующие анализы и анализы обнаружения антител. К ним относятся иммуноферментный анализ (ИФА) и все его производные тесты, такие как иммуноферментный анализ Фалкона (ф-ИФА) и точечный иммуноферментный анализ (т-ИФА). Другие анализы включают:

  • тест на гемагглютинацию (ГА);
  • тесты на косвенное или прямое иммунофлуоресцентное антитело (КИА или ПИА;
  • тест на фиксацию комплемента (ФК).

Хотя легкость использования и время обработки для серологических анализов аналогичны микроскопии, серологические анализы более чувствительны и специфичны. Это важно для людей, чьи мазки крови не позволяют идентифицировать паразита (например, дифференцировать между бабезией и плазмодием) или для пациентов с низкой паразитемией, у которых не выявлено симптомов (например, пациенты с Шагасом).









Классификация инфицированного бессимптомного пациента как отрицательного может привести к передаче паразита во время переливания крови или трансплантации органов. В случае заражения фасциолой, также было показано, что серологические тесты полезны для подтверждения хронического фасциолеза, когда производство яиц низкое или спорадическое. Наконец, при наличии этих тестов можно легко осуществлять контроль за паразитом после терапии.

Иммуноферментный анализ Фалкона (ф-ИФА)

Тест ф-ИФА состоит из использования синтетических и рекомбинантных пептидов для оценки реакции антител на антиген. В прошлом метод был применен к изучению малярии, фасциолеза, шистосомоза и таениаза.

Анализ ИФА на паразитов фото
Иммуноферментный анализ Фалкона состоит из использования синтетических и рекомбинантных пептидов для оценки реакции антител на антиген

Однако этот метод имеет те же недостатки, что и большинство анализов на основе серологии. Антитела, выращенные против пептида из одного белка паразита, могут перекрестно реагировать с белками других видов. Более того, антитела, выращенные против пептида, могут реагировать лишь в некоторых анализах, а некоторые области пептида могут быть более иммуногенными, чем другие.

Точечный иммуноферментный анализ (т-ИФА)

Основное различие между обычным анализом ИФА и точечным заключается в поверхности, используемой для связывания выбранного антигена. В т-ИФА пластиковая пластина заменяется нитроцеллюлозой или другой бумажной мембраной, на которую наносится небольшое количество образца. Выбор связующей матрицы значительно улучшает специфичность и чувствительность анализа, уменьшая связывание неспецифических белков, обычно наблюдаемых при использовании пластических связующих матриц.

Преимущества этого метода включают его простоту использования, быстроту и простоту интерпретации результатов. Он быстрый, экономичный и, что более важно, может использоваться в полевых условиях (например, как измерительный щуп). По всем этим причинам т-ИФА широко применялся и до сих пор широко используется при выявлении паразитарных заболеваний человека и животных, включая амебиаз, бабезиоз, фасциолез, кожный и висцеральный лейшманиоз, цистицеркоз, эхинококкоз, малярию, шистосомоз, токсокариоз, токсоплазмоз, трихинеллез и трипаносомоз.

ИФА
Использование ИФА в состоянии обнаружить паразитов Fasciola gigantica, Haemonchus contortus, Theileria equi, Trypanosoma cruzi и Trypanosoma bruce

В последние несколько лет опубликованные исследования продемонстрировали использование т-ИФА для обнаружения паразитов Fasciola gigantica, Haemonchus contortus, Theileria equi, Trypanosoma cruzi и Trypanosoma brucei.

В последнем исследовании ученые смогли продемонстрировать, что точечный анализ ИФА обладает лучшей чувствительностью и специфичностью, чем обычный ИФА, при обнаружении антител против антиневрофиламента и антигалактоцереброзидов в спинномозговой жидкости субъектов, инфицированных африканскими трипаносомами. Они объясняли большую чувствительность и специфичность т-ИФА использованием нитроцеллюлозной мембраны и показали, что их анализ был успешно воспроизводимым в полевых условиях.

Система быстрого обнаружения антигена (СБОА)

В многих диагностических лабораториях в качестве вспомогательного средства для микроскопии для диагностики малярии были внедрены экспресс-тесты обнаружения антигенов на основе обнаружения иммунохроматографического антигена. Эти анализы состоят из захвата растворимых белков путем комплексообразования их с захватными антителами, внедренными на нитроцеллюлозной полосе. Образец капли крови наносится на полосу и вымывается из нитроцеллюлозной полосы путем добавления нескольких капель буфера, содержащего меченое антитело. Затем комплекс антиген-антитело можно визуализировать непосредственно из мембраны.

С появлением первых экспресс-тестов в 1990-х годах были внесены значительные улучшения в эту технику, что делает возможным использование ее в сельских эндемичных регионах. В настоящее время эти анализы являются быстрыми, стабильными при температурах до 40°C, простыми в использовании и экономичными, что дает множество преимуществ по сравнению с традиционными микроскопическими методами.

Они полезны при идентификации инфекций P. falciparum и P. vivax, но не могут использоваться для выявления инфекций P. malariae и P. ovale. Кроме того, они бесполезны при обнаружении инфекций с очень

Система иммунопреципитации люциферазы (ИПЛ)

Система иммунопреципитации люциферазы (ИПЛ) представляет собой модифицированный анализ на основе ИФА, в котором сыворотка, содержащая антигенспецифические антитела, может быть идентифицирована путем измерения производства света.









В последние годы ИПЛ успешно применяется для идентификации образцов сывороток, инфицированных Strongyloides stercoralis и Loa loa.

Некоторые из преимуществ технологии ИПЛ включают ее быстроту и точность в обнаружении инфицированных пациентов. Чувствительность частично улучшается за счет использования клеток млекопитающих, которые продуцируют слитые антигены, не содержащие загрязняющих бактериальных белков. Кроме того, получают небольшие фоны по сравнению с ИФА. Это значительно облегчает разделение между отрицательными и положительными образцами.